這方面的實(shí)驗(yàn)與應(yīng)用,多見(jiàn)于國(guó)外報(bào)道。目前國(guó)內(nèi)采用不多。下面我們了解一下水蛭素提取方法。
1.提取水蛭素的有效部位
水蛭素主要產(chǎn)生于水蛭的唾液里,當(dāng)水蛭吸血時(shí),將其分泌出來(lái),阻止血液凝固。因而,實(shí)踐表明,提取水蛭素的最佳部位在頭部。i.p.baskova在比較了從水蛭頭部、去頭后的體部及整體水蛭中提取的水蛭素后發(fā)現(xiàn),從頭部得到的水蛭素活性最強(qiáng),從整體得到的活性只有頭部的一部分,而從去頭后的體部得到的是偽水蛭素,其化學(xué)性與水蛭素相同,但無(wú)抗凝活性。
2.提取水蛭素的方法
(1)用能與水混溶的有機(jī)溶劑提?。簭乃晤^部提取:即將水蛭頭部剪下,切成碎片,以其10倍體積的40%丙酮一水提取2次,每次30min。合并提取液,再加1/2體積的809《丙酮一水,加冰醋酸調(diào)至ph4.3—4.5,離心除去沉淀,上清液用氨水調(diào)至ph6.0,在40℃下,減壓濃縮至原體積的l/10。再用10%三氯醋酸調(diào)至ph1.8。最后以10倍體積的冷丙酮(—5℃一0℃)將粗水蛭素沉淀析出。
從水蛭整體中提?。杭磳?0%的冷丙酮加到磨碎的水蛭粉中,攪拌10min后,加氯化鈉(0.2—0.5mol幾)和三氯醋酸(0.1—0.4mol/l),使ph值達(dá)到2.5—3.5,攪拌30—60min,傾出上清液,沉渣再用1/3體積的上述80%丙酮提取1次。合并2次提取液,加入2倍體積的冷丙酮(—10~c),沉淀析出粗水蛭素。
(2)用水提取:
將水蛭磨成細(xì)粉,加入0.5mol幾氯化鈉液,室溫?cái)嚢?0—60min,調(diào)成ph2.0—2.5后,升溫至70'c,攪拌15min離心去渣。上清液調(diào)至ph6.5—7.0,加入l.5倍體積的乙醇,去沉淀。上清液在30℃一40℃,真空濃縮至原體積的1/20左右。向濃縮液中加入等體積的丙酮,去沉淀,再加入4倍體積的冷丙酮(—5℃一0℃),將粗水蛭素沉淀析出。水蛭素的分離,多用離子交換、凝膠層析和等聚焦等方法。如作進(jìn)一步研究,可以分離提到純晶。